液相色譜作為最常用的色譜被廣泛應用于生物、化學、食品分析等領域，帶你了解hplc的種類有哪些？

一、液相色譜的種類

1、吸附色譜

以硅膠或氧化鋁為固定相。分子與硅膠之間的弱相互作用鍵稱為吸附，鍵的溶解解吸。由于洗脫液分子先于樣品分子占據硅膠的活性位點，因此樣品分子只有在與活性位點的相互作用強于洗脫液分子時才能被吸附。樣品分子通過偶極-偶極相互作用可逆地結合到固定相。固定相對物質的保留時間取決于與固定相表面相互作用的程度不同。這是分離樣品成分的機制。

2、親和層析

使用物質相互反應的趨勢作為一種色譜方法。在表現出親和力的兩種成分中，一種是與載體牢固結合的配體，另一種是從洗脫液中吸附的樣品。不適合配體的物質不會被吸附并被洗脫液沖向色譜柱出口。

3、凝膠滲透色譜

與其他色譜方法完全不同。這里，洗脫液流動相不與固定相相互作用。樣品的物質分離是通過樣品分子滲透到固定相的間隙中來實現的。太大的分子被流動相沖走到色譜柱出口。因此，較小的分子稍后到達柱出口。

在正相分布色譜中，固定相比流動相極性更強；在反相色譜（RP- Reverse Phase）中，流動相比固定相極性更強。固定相可以化學鍵合到載體材料上，或者載體材料簡單地涂有固定相。反相色譜主要用于分析極性或非極性物質。恒譜生的USHA C18-G色譜柱可用于反相分析，一次封尾，PH值適用范圍寬，柱效高，具有高選擇性和高分離度的優點，非常適合分析胰島素類物質。

4、分布色譜

也稱為分布色譜法，是液相色譜法的一種新方法。它類似于一種分離方法，其中樣品在壓力下通過液體流動相通過轉子中的液體固定相。更好地溶解在固定相中的分析物保留更長時間，而更好地溶解在流動相中的分析物隨著液體流動相傳輸得更快。

二、高效液相色譜基礎

3.0 HPLC 版本主要區分：等度 HPLC 和 梯度 HPLC。

3.1等度 HPLC

在單次運行中僅使用一種洗脫液組合物進行。因此，流動相和固定相之間的相互作用在整個分離時間跨度內是恒定的。用這種方法可以很好地分離特別相似的物質。這種類型的實施方式特別流行，尤其是在常規應用中，應盡可能爭取所有分離任務。這種方法的另一個優點是您只需要一個泵來泵送洗脫液。

3.2梯度高效液相色譜

洗脫液的組成隨時間不斷變化。以這種方式實現了洗脫液和固定相之間相互作用的不斷變化。樣品物質從固定相上的交換位置更快地置換出來。這使得在可接受的時間內具有非常不同極性的組件的可分離性成為可能。由于此分離過程開始時的洗脫液成分與結束時的不同，因此在開始分離（平衡）之前確保系統處于平衡狀態。洗脫液的混合可以根據每個設備的技術情況以不同的方式進行。

3.2.1低壓梯度

不同洗脫液的混合在進入泵頭之前由比例閥進行，混合物由泵輸送通過設備。這被稱為低壓梯度。在進入泵之前，混合是在工廠的低壓側（大氣壓）完成的。

3.2.2高壓梯度

每種洗脫液由一個單獨的泵泵送，混合在系統的壓力側進行。為此目的，使用混合室。這樣的系統被稱為高壓梯度 HPLC。洗脫液通過 HPLC 系統的傳輸會增加壓力。在這種情況下，主要部分來自列。根據分離材料、其顆粒和形狀、色譜柱長度和使用的洗脫液（不同粘度）壓力，最高可達 300 bar 甚至更高。

三、高效液相色譜基礎

4.0所選 HPLC 系統的組成

標準 HPLC 至少由五個主要設備組成：泵、進樣單元、分離柱、帶有評估軟件的檢測器和餾分收集器。對于 HPLC 分離，使用粒徑為 3 至 20 μm 的顆粒。一方面可以實現較大的分離板數，另一方面流動相在通過分離柱的輸送過程中必須克服相對較高的背壓。所有單元都必須是耐壓的，并且最好彼此無死體積連接。